胎牛血清(FetalBovineSerum,簡(jiǎn)稱FBS)是一種常用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清,胎牛血清富含多種生物活性成分,包括生長(zhǎng)因子、激素、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。這些成分對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和代謝具有重要作用。在細(xì)胞培養(yǎng)中,胎牛血清通常被用作培養(yǎng)基的添加劑,以提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子。...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中,其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些?1.轉(zhuǎn)染試劑的選擇不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn),通過(guò)這些資料可選...
核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ),核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的最重要因素,也是下游分子生物學(xué)試驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。核酸純化的方法及原理如下:一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段,但超過(guò)了該飽和度,裂解體系中的蛋白質(zhì)不會(huì)被一次去除,必須靠多次抽提,方可*去除。且每次抽提都會(huì)損失部分核酸。另外,體系太粘稠的壞處是,蛋白質(zhì)難以*去除,以及基因組DNA會(huì)斷裂得更厲害,所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個(gè)用途是,利用酸性酚可以部分去除DNA的特點(diǎn),在RNA抽提...
在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光,產(chǎn)生電子能級(jí)處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì),后者通過(guò)躍遷釋放能量產(chǎn)生光子,從而導(dǎo)至的發(fā)光現(xiàn)象?;瘜W(xué)發(fā)光是一個(gè)多步驟的過(guò)程。學(xué)發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay,CLIA)誕生于1977年,是近十年來(lái)在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析,將高靈敏的化學(xué)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合起來(lái)建立的微量測(cè)定技術(shù),因此該技術(shù)靈敏度高、線性范圍寬、應(yīng)用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(...
PCR的原理:多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction)簡(jiǎn)稱PCR技術(shù),是近30多年發(fā)展起來(lái)的一種體外擴(kuò)增特異性DNA片段的技術(shù),可在數(shù)小時(shí)之內(nèi)對(duì)僅有幾個(gè)拷貝的基因放大千萬(wàn)倍。那么,PCR的原理是怎樣的呢?PCR技術(shù)實(shí)際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應(yīng)條件下,通過(guò)DNA聚合酶的酶促反應(yīng)完成DNA擴(kuò)增的過(guò)程。PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。PCR反應(yīng)分為三步:1)變性:通過(guò)加熱時(shí)DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,...
腸激酶(Enterokinase,EK,EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動(dòng)物十二指腸內(nèi)的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達(dá)的融合蛋白(識(shí)別位點(diǎn)是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)釋放出目的蛋白,被廣泛用于生物工程制藥的開發(fā)。牛腸激酶由一條結(jié)構(gòu)亞基(重鏈)和一條催化亞基(輕鏈)構(gòu)成,二者以二硫鍵結(jié)合。據(jù)報(bào)道,重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性,同時(shí)對(duì)基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強(qiáng)。天然腸激酶來(lái)源有限,且從動(dòng)物組織提...
簡(jiǎn)析各類細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。定義隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。下文中將從多個(gè)維度,介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染的各類小知識(shí)。一、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達(dá)的蛋?正確折疊并進(jìn)行復(fù)雜修飾,表達(dá)的蛋?更接近真實(shí)自然狀態(tài),便于模擬真實(shí)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境,進(jìn)行蛋白功能研究。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞,表達(dá)?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式:瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系),如圖...
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